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    小C講堂第34講——X-LAB全封閉系統助推NK細胞治療的研發與生產

    小C講堂第34講——X-LAB全封閉系統助推NK細胞治療的研發與生產

    2023-02-23 10:34:46 admin 6

    近些年,雖然生物醫學技術有了長足的進步,但多種腫瘤的治療仍面臨巨大的挑戰。腫瘤的治療手段,最常用的是手術,放化療,但臨床患者中,存在一定比例無法手術或(及)對放化療耐受的情況。新型的免疫治療方法如免疫檢測點阻斷劑(PD-1, PD-L1)和嵌合抗原受體TCAR-T)細胞治療,雖然已成功用于臨床并在部分類型的腫瘤治療中取得巨大的成功,但上述兩種免疫治療手段,尤其是CAR-T免疫治療,惠及的患者有限。NKnatural killer)細胞作為機體天然免疫的重要組成部分,以NK為基礎的免疫治療逐漸成為新的有潛力的研究方向之一 (1) (2)。


    自從20世界70年代最早關于NK細胞的研究報告出現后,NK一直被認為是腫瘤免疫治療的理想選擇之一。因為NK細胞具有如下特點:一是細胞天然具有殺傷靶細胞(腫瘤細胞,被感染的細胞等)能力,該殺傷能力不需要預先激活。二是細胞可通過抗體介導的細胞毒作用(ADCC)殺傷靶細胞。三是細胞可以分泌細胞因子,趨化因子和生長因子等 (1) (3)。


    NK逐漸成為免疫治療領域冉冉升起的一顆新星。但NK為基礎的免疫治療,從研究到臨床應用,還面臨很多挑戰,如高質量治療用NK細胞的獲取,激活,擴增等。目前,治療用NK細胞的來源主要有iPSC誘導分化而來,或從血液中分離NK并進一步激活擴增等。本期,小C將與您分享,用無Ficoll 淋巴細胞分離系統(X-LAB),從外周血樣本中分離PBMC,對該分離的PBMC進行激活擴增處理后,收獲高質量NK細胞的相關數據*。該分離方法具有封閉系統,操作簡單,NK回收率高,細胞活率等狀態維持良好,且不引入Ficoll 外源物等特點。

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    1.  Corning X-Lab 從全血中分離單個核細胞流程圖
    Corning X-lab 無需添加密度梯度分離液,基于外周血中不同細胞類型的密度差異,利用沉降并結合光學分析,在封閉系統中分離外周血單個核細胞,整個細胞分離處理過程只需要35分鐘,快速,簡單可靠

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    2.  Corning X-Lab 從全血中分離單個核細胞的回收效率
    康寧
    X-LAB分離獲得的PBMC,在回收率上優于手動法密度梯度離心,細胞活力相當

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    3.  Corning X-Lab 從全血中分離單個核細胞組成分析
    利用流式細胞儀分析手動法和
    X-lab 法分析各自分離獲得的單個核細胞,其各自細胞組成分類和得率沒有明顯差異

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    4.  Corning X-Lab 分離獲得的PBMC 進行NK 細胞的活化與擴增
    分別取
    3X107利用手動法和X-Lab 分離的PBMC 細胞,利用NK細胞因子活化誘導試劑盒進行NK 細胞的擴增,培養周期15 天,其細胞形態上沒有明顯差異

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    1.  Corning X-Lab 分離獲得的PBMC 進行NK 細胞的活化擴增結果比較X-Lab 和手動法分離PBMC NK 細胞擴增, NK細胞收獲總量,NK細胞純度上兩者沒有顯著差異

    結論和分析


    • 康寧X-LAB不依賴密度梯度離心分離液,而是直接利用血液中不同類型細胞密度不同,采用沉降法并結合光學分析,在封閉系統中快速可靠的分離單個核細胞(MNC)。整個細胞分離過程預計需要35分鐘,中間不需要手動移液步驟

    • 康寧X-LAB分離獲得的PBMC,在回收率上優于手動法密度梯度離心,且回收到的PBMC 細胞組成相似。

    • 利用康寧X-LAB 分離獲得的PBMC,進一步用于NK細胞的活化和擴增,與手動法密度梯度離心相比,兩者在細胞形態,NK活化,和終產品NK細胞得率和純度上沒有顯著差異

    • 康寧X-LAB 系統提供一種快速,可靠的封閉系統用于外周血單核細胞的分離,可以支持NK細胞療法的研發與生產



    參考文獻

    1.Michel, T.; Ollert, M.; Zimmer, J. A Hot Topic: Cancer Immunotherapy and Natural Killer Cells. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 797. https://doi.org/10.3390/ ijms23020797

    2.Du, N.; Guo, F.; Wang, Y.; Cui, J. NK Cell Therapy: A Rising Star in Cancer Treatment. Cancers 2021, 13, 4129. https://doi.org/10.3390/cancers131641

    3.Kiessling, R.; Klein, E.; Pross, H.; Wigzell, H. “Natural” killer cells in the mouse. II. Cytotoxic cells with specificity for mouse Moloney leukemia cells. Characteristics of the killer cell. Eur. J. Immunol. 1975, 5, 117–121


    致謝

    **本文測試數據部分來自臺灣捷昇生物科技有限公司并已獲取數據所有人同意。感謝捷昇生物科技有限公司的支持。

    文章來源于康寧生命科學



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