小C講堂第35講——有效支持iPSC連續傳代擴增培養

培養干細胞尤其iPSC有多種包被方法，例如用動物來源的小鼠滋養層細胞、層粘連蛋白、Matrigel，人來源的基質蛋白等，但是該類生物來源物質在擴產及應用上有一定的限制，其批間穩定性會受生物體差異影響。那么有沒有更好的選擇呢？趕緊跟著小C一起來往下看吧。

Corning Synthemax 為無外源合成多肽共聚物，模擬細胞天然環境中胞外基質的特性支持貼壁細胞生長，使用方法方便快捷，可以用水直接溶解進行多種培養器皿表面包被，可在保證多能分化潛能的前提下支撐多功能干細胞擴增培養，包括iPSC和ES等。

Synthemax表面可以在保障干細胞分化多能性的情況下，在無血清培養基中維持干細胞進行20代以上的擴增。

●穩定的細胞倍增時間和細胞活力

●維持干細胞未分化狀態及細胞形態，例如marker Oct4, TRA-1-60, SSEA4的表達

●維持常規核型

●定向分化成特定組織類型，例如心肌細胞。

●合成工藝，無外源添加，適用于GMP級別細胞生產工藝

●批間一致性好，可追溯

圖1 . 在四種培養方式中，iPSC（201B7） 細胞形態相近，第一種條件下細胞形態略微有一點不同，但在后續性能驗證中無明顯差異。bar=100μm

圖2. 對人iPSC連續10代培養的倍增時間，每種條件下各代次進行3次平行培養。四種培養條件下倍增時間接近，均可滿足人iPSC的培養

圖 3. 每種培養條件下iPSC未分化狀態Markers染色結果，bar=100μm。四種培養條件下iPSC未分化狀態標志蛋白表達情況無明顯差異，均可滿足人iPSC的擴增培養

圖 4.  四種培養條件下培養的人iPSC OCT4或者SSEA-4表達情況流式分析結果，四種條件相類似無明顯差異

圖 5. 人iPSC在MEF上先培養然后進行培養表面轉換后倍增時間對比結果。雖然在剛轉換時有微小差異，但在后續傳代中趨于一致。藍色線： MMEF直接轉換為Corning Synthemax；紅色線：MMEF 先轉換為Matrigel包被表面再轉換為Corning Synthemax包被表面

圖 6. 在第一種和第四種培養條件下的iPSC 進行定向分化，形成具有收縮功能擬胚體的百分比分別為40%左右和30%左右。橙色為第一種培養組合Corning Synthemax + X Medium；綠色為第四種培養組合MEF Feeder Cells + E Medium。6次獨立實驗，480EBs/實驗/培養條件

文章來源于康寧生命